簡析各類細胞轉染方法

　　細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。定義 隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。

　　下文中將從多個維度，介紹細胞轉染的各類小知識。

一、瞬時轉染與穩(wěn)定轉染

　　哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達的蛋?正確折疊并進行復雜修飾，表達的蛋?更接近真實自然狀態(tài)，便于模擬真實細胞內(nèi)環(huán)境，進行蛋白功能研究。把目的基因轉入哺乳動物細胞，表達?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時轉染與穩(wěn)定轉染（構建穩(wěn)定細胞系），如圖1.所示。

　　瞬時轉染與穩(wěn)定轉染有如下特點：

二、轉染方法

　　細胞轉染方法可分為化學法，物理法，生物法，也可把化學法、物理法稱為非病毒載體，生物法稱為病毒載體。不同的轉染方法可分別用于瞬時轉染和穩(wěn)定轉染，不過效率與效果不同。

三、病毒載體也是細胞轉染的產(chǎn)物

　　病毒介導轉染是目前在細胞治療等應用中有前景的方向，化學法，物理法在實施過程中，對細胞均有一定程度的損害，所以用于細胞治療藥物的研究受到限制。病毒介導轉染也叫侵染。人類有漫長的和病毒斗爭的歷史，對病毒研究較為清晰，改造后病毒轉染結果相對可以控制。目前使用病毒載體的藥物已經(jīng)有多個上市，比如SMA基因治療藥物采用AAV病毒遞送，一針200萬美元，已上市3個CART用慢病毒或逆轉錄病毒（HIV的變種）來轉入基因，已上市的埃博拉病毒疫苗用AD26病毒載體等。

　　病毒載體的制備是目前CRO服務中的重要內(nèi)容，病毒載體的生產(chǎn)（如圖）先用大腸桿菌等生產(chǎn)出質粒，然后把多種質粒（通常是三質粒或四質粒系統(tǒng)）通過轉染進入細胞中，表達出病毒載體的外殼蛋白、功能蛋白等，然后組裝成含目的基因的病毒載體，通過純化工藝獲得工具病毒，工具病毒感染細胞，腺病毒可于轉染成功2小時后即可檢測到表達產(chǎn)物，逆轉錄病毒則需要經(jīng)過多輪賽選，選擇基因整合進細胞基因組的穩(wěn)定細胞株，用于后續(xù)研究。

Ps：李記生物EZ Trans細胞轉染試劑可用于各類病毒包裝。