原代細胞凍存液的制備和使用對于細胞的保存和復(fù)蘇具有重要意義。以下是制備和使用原代細胞凍存液的步驟：
 

　　制備：
 

　　準(zhǔn)備所需試劑和器材，包括DMSO、FBS、培養(yǎng)基、離心管、移液管、細胞計數(shù)板、顯微鏡等。
 

　　收集細胞樣品，加入適量培養(yǎng)基進行洗滌。
 

　　棄去培養(yǎng)基，加入適量DMSO和FBS混合液進行細胞凍存液的制備。
 

　　將細胞凍存液分裝到凍存管中，每個凍存管中加入1毫升細胞凍存液，標(biāo)記好凍存管。
 

　　將凍存管放入梯度凍存盒中，然后保存至-80℃過夜(如果沒有凍存盒，可以先在4℃冰箱放置30 min，然后轉(zhuǎn)移至-20℃放置1-2 h，最后轉(zhuǎn)移至-80℃過夜)，第二天取出放入液氮罐，并記錄好位置信息。
 

　　使用：
 

　　準(zhǔn)備所需器材和試劑，包括細胞凍存液、離心管、移液管、培養(yǎng)基等。
 

　　從液氮罐中取出凍存管，迅速放入37℃水浴鍋中進行復(fù)蘇。
 

　　復(fù)蘇后，將細胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
 

　　保存：
 

　　在復(fù)蘇后數(shù)小時內(nèi)將細胞傳代并培養(yǎng)，以便快速擴增和存儲。
 

　　可以將細胞保存在常規(guī)培養(yǎng)箱中，但需要注意溫度和濕度的控制。
 

　　可以使用細胞凍存盒將細胞保存于-80℃冰箱中，以延長細胞的存活時間。