簡(jiǎn)要描述:PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個(gè)高度敏感的基于熒光技術(shù)定量純化蛋白質(zhì)的試劑盒,其檢測(cè)蛋白濃度范圍為0.1-15 ug/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析,PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳,此外,與NanoOrange蛋白質(zhì)定量測(cè)定技術(shù)相比具有更好的線性和重現(xiàn)性。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | AP12L034/AP12L036 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 100 assays | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個(gè)高度 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個(gè)高度敏感的基于熒光技術(shù)定量純化蛋白質(zhì)的試劑盒,其檢測(cè)蛋白濃度范圍為0.1~10 μg/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析,PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳,此外,與NanoOrange蛋白質(zhì)定量測(cè)定技術(shù)相比具有更好的的線性和重現(xiàn)性。PikoOrange蛋白定量試劑盒可顯示不同蛋白質(zhì)之間的小變異性,且熒光信號(hào)穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)16 h;其受測(cè)樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用。需特別注意的是,PikoOrange對(duì)鹽類、緩沖液、去垢劑或是其他化學(xué)物質(zhì)都有不同程度的耐受性(表1)。
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
PikoOrange 蛋白定量試劑盒 | AP12L034 | 100 assays | 180 |
PikoOrange 蛋白定量試劑盒 | AP12L036 | 1000 assays | 1500 |
產(chǎn)品組分
組分 | AP12L034 | AP12L036 |
A: PikoOrange buffer, 10X (contains 2mM sodium azide) | 2.5 mL | 25mL |
B: PikoOrange dye, 500X in DMSO | 125 μL | 1.25 mL |
C: Bovine serum albumin (BSA) standard, 2mg/mL (contains 2 mM sodium azide) | 40 μL | 0.4 mL |
運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。組分A常溫保存;組分B常溫避光保存;組分C 4℃ 保存。有效期36個(gè)月。
【注】:如果緩沖液出現(xiàn)沉淀,可加熱到37℃并漩渦溶解。
使用方法
制備1x PikoOrange緩沖液: 1:10 稀釋10x緩沖液在dH2O。例如,添加1 mL10x 緩沖液至9 mL dH2O。 PikoOrange緩沖液可以儲(chǔ)存在室溫下。
使用前準(zhǔn)備PikoOrange工作液:將200xPikoOrange染料按1:200用1x PikoOrange緩沖液稀釋。例如,添加25 μL 500x PikoOrange染料至5 mL 1x PikoOrange緩沖液。
注意:您將需要大約3 mL工作液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(見表2)以及每孔檢測(cè)樣品250 μL工作液。
準(zhǔn)備未知樣本:10 μL 樣本添加 250 μL PikoOrange工作液。
注意:您可能需要稀釋未知樣本以得到不同濃度的樣本。樣品稀釋可能會(huì)減少干擾物質(zhì)的影響。
準(zhǔn)備一個(gè)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線所需的BSA濃度,如表2所示。
樣本和標(biāo)準(zhǔn)蛋白加熱至90~ 95℃ 10分鐘,此過程需避光操作。
取出樣本室溫避光放置20 min冷卻。短時(shí)間離心收集全部樣本。
每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品或未知樣品取200 μL轉(zhuǎn)移到96孔酶標(biāo)板,熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)。激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為480/598 nm。
【注】:樣品可以被轉(zhuǎn)移到熒光試管使用熒光儀測(cè)量。如果需要超過200 μL體積測(cè)量,等比例放大配置方案。
表1:PikoOrange對(duì)不同化學(xué)物質(zhì)的耐受性
化合物 | 承受濃度峰值 |
SDS | 0.01% |
Triton X-100 | Below 0.001% |
Tween 20 | Below 0.001% |
CHAPS | Below 0.001% |
Sodium deoxycholate (DOC) | Below 0.001% |
Urea | 10 mM |
DTT | 100 mM |
beta-ME | 0.1% |
Ammonium sulfate | 1 mM |
Sodium azide | 2 mM |
Imidazole | 50 mM |
DNA | 10ug/mL |
EDTA | 1mM |
Sucrose | 10 mM (0.34%) |
Glycerol | 1% |
PBS | 0.02X |
NaCl | 1 mM |
CaCl2 | 0.01 mM |
MgCl2 | 0.2 mM |
表2:準(zhǔn)備BSA樣品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
BSA體積 | 工作液體積 | BSA 終濃度(μg/mL) | ||
A | 5 μL BSA std (2 mg/mL) | 995 μL | 10 | |
B | 250 μL solution A | 250 μL | 5 | |
C | 250 μL solution B | 250 μL | 2.5 | |
D | 200 μL solution C | 300 μL | 1 | |
E | 250 μL solution D | 250 μL | 0.5 | |
F | 250 μL solution E | 250 μL | 0.25 | |
G | 100 μL solution F | 150 μL | 0.1 | |
H | 0 μL solution G | 250 μL | 0 | |
圖1:PikoOrange比NanoOrange有更好的線性和重現(xiàn)性 |
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