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SDS細胞裂解液(帶抑制劑)

簡要描述:SDS細胞裂解液(帶抑制劑)是一種比較強烈的細胞組織裂解液,通過陰離子去垢劑SDS促進細胞膜的崩解,特別適用于膜蛋白或者細胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解,有利于膜蛋白,胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。

  • 產品型號:AP01L065
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-08-06
  • 訪  問  量:1983

詳細介紹

品牌其他品牌CAS/
分子式/純度/
分子量/貨號AP01L065
規(guī)格100ml供貨周期現貨
主要用途通過陰離子去垢劑SDS促進細胞膜的崩解。應用領域生物產業(yè)
SDS細胞裂解液 (帶抑制劑)

產品描述
  SDS細胞裂解液(帶抑制劑)是一種比較強烈的細胞組織裂解液,通過陰離子去垢劑SDS促進細胞膜的崩解,特別適用于膜蛋白或者細胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解,有利于膜蛋白,胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。本產品具有有強烈的蛋白變性作用,不能用于非變性蛋白方面的研究。本產品裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、染色質免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation,ChIP)等
訂購信息

產品名稱

貨號

規(guī)格

價格

SDS細胞裂解液(帶抑制劑)

AP01L065

100 mL

228

產品組分

產品編號產品組成包裝規(guī)格
AP01L065SDS細胞裂解液100 mL
磷酸酶抑制劑2*1 mL
PMSF1 mL
產品說明書一份

保存方法
  裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保質期一年。
使用方法
1. 對于培養(yǎng)細胞樣品

(1) 融解SDS細胞裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的終濃度為1 mM。
(2) 細胞裂解

對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2秒后,細胞就會被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10 min。
對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。如果細胞量較多,必需分裝成50~100萬細胞/管,然后再裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。具體SDS細胞裂解液的使用量參照表1.
(3) 充分裂解后,10000~14000rpm離心3~5 min,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 對于組織樣品:
(1) 把組織*切成細小的碎片。
(2) 融解SDS細胞裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20毫克組織加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。具體SDS細胞裂解液的用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。

注意事項

1. 用SDS細胞裂解液裂解得到的蛋白樣品,含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定蛋白濃度。
2. 通常6孔板每孔細胞加入150 μL裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。如果用于ChIP,建議6孔板每孔細胞至少加入200 μL裂解液。
3. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

表1 :SDS細胞裂解液的使用量

樣品種類樣品來源收獲細胞數RIPA用量可制備樣品數
細胞6孔板2.5*106150-250 μL400-600
60 mm培養(yǎng)板5.2*106300-500 μL200-300
90 mm培養(yǎng)板12.2*106500-1000 μL100-200
25 cm2培養(yǎng)瓶5*106300-500 μL200-300
75 cm2培養(yǎng)瓶2*1071000-2000 μL50-100
組織20 mg組織塊
150-250 μL400-600

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