簡(jiǎn)要描述:NP40裂解液(帶抑制劑)對(duì)胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用,有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。
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品牌 | 其他品牌 | CAS | / |
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分子式 | / | 純度 | / |
分子量 | / | 貨號(hào) | AP01L054 |
規(guī)格 | 100ml | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
NP40裂解液(帶抑制劑)是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液,主要成分為50 mM Tris(pH7.4),150 mM NaCl,1% NP-40以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制。對(duì)胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用,有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。適用于常規(guī)的Western、IP和co-IP等實(shí)驗(yàn)蛋白樣品的制備。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
NP40裂解液(帶抑制劑) | AP01L054 | 100 mL | 228 |
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品組成 | 包裝規(guī)格 |
AP01L054 | NP40裂解液 | 100 mL |
磷酸酶抑制劑 | 2*1 mL | |
PMSF | 1 mL | |
產(chǎn)品說(shuō)明書 | 一份 |
保存方法
裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保質(zhì)期一年。
使用方法
對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。
對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,混勻,充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50~100萬(wàn)細(xì)胞/管,然后再裂解。具體NP-40裂解液的使用量參照表1。
2. 對(duì)于組織樣品
(1) 把組織*切成細(xì)小的碎片;
(2) 融解NP-40裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20 mg組織加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項(xiàng)
然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
樣品種類 | 樣品來(lái)源 | 收獲細(xì)胞數(shù) | RIPA用量 | 可制備樣品數(shù) |
細(xì)胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250 μL | 400-600 |
60 mm培養(yǎng)板 | 5.2*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
90 mm培養(yǎng)板 | 12.2*106 | 500-1000 μL | 100-200 | |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 5*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
75 cm2培養(yǎng)瓶 | 2*107 | 1000-2000 μL | 50-100 | |
組織 | 20 mg組織塊 | 150-250 μL | 400-600 |
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