產(chǎn)品描述
RIPA裂解液（中）是一種經(jīng)典的動(dòng)物組織/細(xì)胞快速裂解液，通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對(duì)組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì)，對(duì)細(xì)胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用。
李記生物 RIPA 裂解液(中) 不含 PMSF 組分; 適用于 PAGE、Western Blotting 和免疫沉淀(IP)的研究。
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運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。4℃保存，有效期 12 個(gè)月。
配方表
25mM Tris•HCl，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，pH 7.6
使用方法
貼壁細(xì)胞
1. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次。按照 6 孔板每孔加入 150-200ul 的裂解液的比例均勻加
入裂解液，如果細(xì)胞密度過高可增加裂解液的量至 250-300 uL?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會(huì)使細(xì)胞裂解不
充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。
3. 用槍吹打數(shù)下，冰上放置 10 min，期間每隔 2 min 用槍吹打數(shù)下。
4. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞裂解液于 1.5 mL EP 管中。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5min。
6. 收集上清。
懸浮細(xì)胞
1. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2. 收集細(xì)胞 0.5~2×107于 1.5mL 離心管中，1mL 預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次，1,000xg 離心 3 min，棄上清，
重復(fù)三次。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細(xì)胞密度過高可增加裂解液的
量至 250-300uL?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分，影響蛋白提取的質(zhì)量。
4. 用槍吹打數(shù)下并劇烈震蕩，冰上放置 10 min，期間每隔 2 min 震蕩一次。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5 min。
6. 收集上清。
組織樣品
1. 把組織jian成細(xì)小的碎片。
2. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號(hào):AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
3. 按照每 100mg 組織加入 1mL 裂解液的比例加入裂解液（如裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液，如果需要
增加蛋白濃度可適當(dāng)減少使用的裂解液體積）。
4. 用勻漿器勻漿，直至充分裂解（為防止蛋白降解請(qǐng)于冰上操作）。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5 min。
6. 收集上清。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 如需檢測(cè)磷酸化蛋白，則需要額外添加磷酸酶抑制劑 II cocktail（50×）(貨號(hào):AP03L025) 。
3. RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA
等的復(fù)合物。在不檢測(cè)基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；
如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心
取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時(shí)，通常不必進(jìn)行超
聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。
4. RIPA 裂解液（中）含有較高濃度的去垢劑，不能用 Bradford 法測(cè)定蛋白。
5. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。
然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使
用勻漿器那樣裂解得比較充分。
6. 通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 μL 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量
到 200 μL 或 250 μL。

表 1: RIPA 裂解液的使用量

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。