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當(dāng)前位置:首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 蛋白與免疫 > 蛋白制備 > AP01L013/AP01L014RIPA裂解液(強(qiáng))

RIPA裂解液(強(qiáng))

簡(jiǎn)要描述:RIPA裂解液(強(qiáng)),通過(guò)組合離子型去垢劑和非離子去污劑對(duì)組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì),是一種經(jīng)典的動(dòng)物組織/細(xì)胞快速裂解液。

  • 產(chǎn)品型號(hào):AP01L013/AP01L014
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-08-06
  • 訪  問(wèn)  量:1926

詳細(xì)介紹

品牌Life-iLab/李記生物CAS/
分子式/純度/
分子量/貨號(hào)AP01L013/AP01L014
供貨周期現(xiàn)貨應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合

RIPA裂解液 (強(qiáng))

產(chǎn)品描述
RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液,是一種經(jīng)典的動(dòng)物組織/細(xì)胞快速裂解液,通過(guò)組合離子型去垢劑和非離子去污劑對(duì)組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì),對(duì)細(xì)胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用。適用于PAGE、Western Blotting和免疫沉淀(IP)的研究。
本產(chǎn)品不含PMSF組分。
訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格
RIPA裂解液(強(qiáng))AP01L01350mL
RIPA裂解液(強(qiáng))AP01L014100mL

運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。4℃保存,有效期12個(gè)月。
使用方法
貼壁細(xì)胞
1.      取適量裂解液,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,不含EDTA) (貨號(hào):AP02L084) 或PMSF(終濃度為 1 mM,但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性)。
2.      去除細(xì)胞培養(yǎng)液,用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入150-200ul 的裂解液的比例均勻加入裂解液,如果細(xì)胞密度過(guò)高可增加裂解液的量至250-300 uL?!咀ⅰ浚毫呀庖哼^(guò)少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分,影響蛋白提取的質(zhì)量。
3.      用槍吹打數(shù)下,冰上放置10 min,期間每隔2 min用槍吹打數(shù)下。
4.      轉(zhuǎn)移細(xì)胞裂解液于1.5 mL EP管中。
5.      12,000 g,4℃ 離心5min。
6.      收集上清。
懸浮細(xì)胞
1.      取適量裂解液,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,不含EDTA) (貨號(hào):AP02L084) 或PMSF(終濃度為 1 mM,但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性)。
2.      收集細(xì)胞0.5~2x107于1.5mL離心管中,1mL預(yù)冷的PBS洗滌兩次,1,000xg 離心3 min,棄上清,重復(fù)三次。
3.      按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液,如果細(xì)胞密度過(guò)高可增加裂解液的量至250-300uL?!咀ⅰ浚毫呀庖哼^(guò)少會(huì)使細(xì)胞裂解不充分,影響蛋白提取的質(zhì)量。
4.      用槍吹打數(shù)下并劇烈震蕩,冰上放置10 min,期間每隔2 min震蕩一次。
5.      12,000 g,4℃ 離心5 min。
6.      收集上清。
組織樣品
1.      把組織*成細(xì)小的碎片。
2.      取適量裂解液,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,不含EDTA) (貨號(hào):AP02L084) 或PMSF(終濃度為 1 mM,但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性)。
3.      按照每100mg組織加入1mL裂解液的比例加入裂解液(如裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液,如果需要增加蛋白濃度可適當(dāng)減少使用的裂解液體積)。
4.      用勻漿器勻漿,直至充分裂解(為防止蛋白降解請(qǐng)于冰上操作)。
5.      12,000 g,4℃ 離心5 min。
6.      收集上清。
注意事項(xiàng)

  1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

  2. 如需檢測(cè)磷酸化蛋白,則需要額外添加磷酸酶抑制劑II cocktail(50×)(貨號(hào):AP03L025) 。

  3. RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-kappaB、p53等時(shí),通常不必進(jìn)行超聲處理,就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。

  4. RIPA(強(qiáng))裂解液含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測(cè)定蛋白。

  5. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

  6. 通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。

表1: RIPA裂解液的使用量

樣品來(lái)源培養(yǎng)容器收獲細(xì)胞數(shù)RIPA用量可制備樣品數(shù)
細(xì)胞6孔板2.5 x 106150-250 μL400~600
60 mm培養(yǎng)板5.2 x 106300-500 μL200~300
90 mm培養(yǎng)板12.2 x 106500-1000 μL100~200
25 cm2培養(yǎng)瓶5 x 106300-500 μL200~300
75 cm2培養(yǎng)瓶2 x 1071000-2000 μL50~100
組織20 mg組織塊2.5 x 106150-250 μL400~600




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